إنتاج أنزيم البروتيز من عزالت بكتيريا الزوائف الزنجارية وتنقيتة ودراسة بعض خصائصة

Abstract

نفذت هذه الدراسة لغرض عزل وتشخيص البكتريا المحللة للبروتين والمنتجة النزيم البروتيز وتشخيصها من بعض العينات السريرية للمرضى المراجعين لمستشفيات مدينة الرمادي ، وتحديد الظروف المثلى إلنتاج إنزيم البروتيز وتنقيته ودراسة خصائص اإلنزيم والظروف المثلى لعمله. واستعمل للعزل اوساط زرعية مثل وسط اكار الماكونكي ووسط الجكليت اكار واكار الدم ووسط الجيالتين الصلب فضال عن الفحوصات المورفولوجية والكيموحيوية ، و اختبرت قابلية العزالت على انتاج انزيم البروتيز باستعمال وسط الجيالتين الصلب ووسط مسحوق قرون االغنام ووسط مسحوق كوالح الذرة وتميزت العزالت بقدرتها على انتاج انز يم البروتيز مع وجود اختالف في كفاءة هذه العزالت ، انتخبت العزلة المحلية .p aeruginosa المعزولة من الحروق ألنها االكفأ في انتاج االنزيم. واختبرت كفأتها في مقاومة المضادات الحيوية ، واظهرت العزلة مقاومة ألغلب المضادات الحيوية المستعملة في الدراسة ، والسيما مضادات البيتا الكتام والتتراسايكلينات ومجموعة االمينوكاليكوسيد ، اال انها كانت حساسة لمضاد الببراسلين . وحددت الظروف المثلى إلنتاج انزيم البروتيز ، اذ كان الوسط الزرعي مسحوق قرون االغنام ، ذو االس الهيدروجيني x 1) بـ والملقح) ، 7) 6 ْ 10 (خلية / مللتر مع الحضن لمدة (24 (ساعة في (32 (هي افضل الظروف إلنتاج االنزيم . م و أظهرت الخطوات المتسلسلة تنقية إنزيم البروتيز المنتج من العزلة المحليـة aeruginosa. Pبالترسيب بملح كبريتات االمونيوم بنسبة إشباع تراوحت بين)-80 20 )%وان النسبة 60 %هي األفضل في الترسيب إذ أعطت فعالية نوعية قدرها 03.32 وحدة/ملغم بعدد مرات تنقية 60.1 مرة وحصيلة إنزيمية69.33 ،%وأدى إمرار المحلول اإلنزيمي على عمود المبادل األيوني Cellulose-DEAE إلى زيادة نقاوة اإلنزيم إذ ارتفعت الفعالية النوعية إلى 68.57 وحدة/ملغم وعدد مرات تنقية إلى 89.2مرة وبحصيلة إنزيمية 35 .%جمعت األجزاء التي أظهرت فعالية إنزيمية عالية وأخضعت لعملية الفصل بطريقة الترشيح الهالمي بعمود هالم G200-Sephadexأعطت هذه الخطوة فعالية نوعية 87.34وحدة/ملغم وعدد مرات تنقية 74.1 مرة وحصيلة إنزيمية مقدارها 16.32.%و بينت نتائج توصيف اإلنزيم ان الر قم الهيدروجيني األمثل ودرجة الحرارة المثلى لفعاليته بلغت 5.6 و 45 م على التوالي، وأعطى اإلنزيم أعلى فعالية إنزيمية عند حضنه عند الرقم الهيدروجيني ودرجة الحرارة أعاله