دور عزلة .sp Streptomyces في تحسین إنتاج أنزیم السلیلیز بوساطة بكتریا enzymogenes Lysobacter باستعمال سعف النخیل

Abstract

تهــدف هــذه الدراســة الــى محاولــة تحســین اســتعمال ســعف النخیــل المتــوفر بكمیــات كبیــرة لانتــاج انــزیم السـلیلیز باسـتعماله مصـدرا كربونیـا للعزلـة البكتیریـة enzymogenes.L مـن خـلال اسـتعمال اللقـاح المسـاعد مـن بكتریـــا .sp Streptomyces مقارنـــة بعـــدد مـــن المعـــاملات الاخـــرى المســتعملة فـــي تهیئـــة وتحضـــیر المصـــدر الكربـــوني ، والتـــي تضـــمنت المعاملـــة بالقاعـــدة هیدروكســـید الصـــودیوم NaOH وحـــامض الهیـــدروكلوریك HCl والتسخین . اختبرت قابلیة كل من بكتریا enzymogenes.L وبكتریا .sp Streptomyces في تحلیل السلیلوز فـي وسط السلیلوز الصلب وكـذلك اختبـرت العـزلتین معـا لمعرفـة امكانیـة اسـتعمالهما معـا فـي انتـاج الانـزیم ، واظهـرت النتائج ان اعلى قطر للمنطقة الشفافة الناتج عن تحلل السلیلوز كان عند استعمال العزلتین معا ومعاملة المصدر الكربوني بهیدروكسید الصـودیوم حیـث بلـغ معـدل قطـر المنطقـة الشـفافة 7.5 سـم ، امـا تـاثیر المعـاملات المختلفـة التـــي اجریـــت للمصـــدر الكربـــوني فـــي انتــاج انـــزیم الســـلیلیز فـــي وســـط الســلیلوز الســـائل فـــأظهر اســتعمال بكتریـــا .sp Streptomyces كمعاملـة لتحضـیر وتهیئـة المصـدر الكربـوني لتحلیلـه مـن قبـل بكتریـا enzymogenes.L مع تعدیل الـرقم الهیـدروجیني لوسـط الانتـاج افضـل انتاجیـة للانـزیم حیـث بلغـت الفعالیـة الانزیمیـة 727.8 وحـدة / مللتر . وتبین ان تركیز 1 %من المصدر الكربوني كان الافضل في انتاج الانـزیم ، اذ بلغـت الفعالیـة الانزیمیـة 727.8 وحدة / مللتر ، واعطت طریقة اضافة المصدر الكربوني بدفعات یومیة الى وسـط الانتـاج افضـل انتاجیـة للانزیم اذ بلغت الفعالیة الانزیمیة 902.10 وحدة / مللتـر ، فیمـا لـم تعـط معاملـة اضـافة المصـدر بطریقـة التغذیـة الیومیة المتزامنة مع السحب الیومي للمنتوج الا فعالیة انزیمیة مقدارها 878.10 وحدة / مللتر . اجریـت عملیـة التنقیـة للانـزیم المنـتج بوسـاطة بكتریـا enzymogenes.L باتبـاع خطـوات تنقیـة تضـمنت الترسـیب بكبریتـات الامونیـوم بنسـبة اشـباع 90 %وكروموتوغرافیـا التبـادل الایـوني بوسـاطة عمـود المبـادل الایـوني Sephacyl-DEAE والترشـیح الهلامـي بعمـود 300-S -Sephacryl وقـد امكـن اسـترداد 06.86 %مـن الانـزیم ، كمـا بینـت نتـائج دراسـة الظـروف المثلـى لفعالیـة الانـزیم بعـد التنقیـة ان الـرقم الهیـدروجیني الامثـل لفعالیـة الانـزیم كان 6 ودرجة الحرارة المثلى 60 ْم وبمدة تفاعل 90 دقیقة . اظهرت نتیجة تعیین الوزن الجزیئي للانزیم بوساطة طریقة الترشیح الهلامي ان الوزن الجزیئي للانزیم كان بحدود 36000 دالتن ، فیما بینـت دراسـة حركیـات الانـزیم ان قیمـة ثابـت میكـالس Km كانـت (73.12ملغـم/مللتـر/دقیقـة) في حین ان سرعة التفاعل القصوى Vmax كانت (5.12وحدة/مللتر).